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定氮儀測定樣品中蛋白質(zhì)的過程詳解

來源: http://www.fleetco2.com  類別:實用技術(shù)  更新時間:2015-10-09  閱讀

      定氮儀是測定樣品中蛋白質(zhì)含量的重要儀器,其測定過程主要包括樣品消化、定氮儀的準(zhǔn)備、樣品測定、儀器的清洗和結(jié)果計算這幾部,為了詳細(xì)了解定氮儀測定樣品中蛋白質(zhì)的過程,下面我們就來一一進(jìn)行說明:

      1、樣品消化:

      100ml消化瓶中+樣品(固體0.2~2.0g,液體10~20ml)+催化劑(硫酸鉀6g、硫酸銅0.2g)+濃H2SO420ml,混合加熱至澄清透明的藍(lán)綠色溶液,即消化液。將消化液冷卻 ,移入100ml容量瓶定容備用。

      2、定氮儀的準(zhǔn)備 

      (1)觀察蒸發(fā)爐內(nèi)水位,不能超過不銹鋼電極。(如果超過,請先把水排完)

      (2)關(guān)掉排水閥,打開主電源,打開冷卻水,打開綠色蒸汽開關(guān),然后觀察電流表。燈電流表指針升到4A(安培)左右,關(guān)掉蒸汽開關(guān)。待其回到0A(安培)后再打開蒸汽開關(guān)。電流升到4A(安培)后再關(guān)掉,這樣反復(fù)開關(guān)(0-20)左右直到蒸氣從塑料管內(nèi)噴出,讓其噴半分鐘左右,關(guān)掉蒸氣開關(guān),儀器進(jìn)入正常的待機(jī)狀態(tài)。

      3、樣品測定 

      (1)取錐形瓶+2%硼酸10ml+混合指示劑1-2滴放在定氮儀的托架上,在消化管中加入10ml的樣品消化液放到蒸餾器上,按國標(biāo)加入NaOH和H2O,設(shè)定好蒸餾時間6分鐘,打開蒸汽開關(guān)進(jìn)行蒸餾。 

      (2)蒸餾結(jié)束后,先取下硼酸接受瓶,再關(guān)掉蒸氣開關(guān),然后戴上手套迅速拿下消化管。 

      (3)接受瓶中的吸收液用0.05mol/LHCl標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至終點(diǎn)。(平行操作兩次) 

      4、儀器的清洗: 

樣品測定結(jié)束后,用水清洗堿泵多次后關(guān)閉冷卻水;打開蒸氣開關(guān),打開排水閥取下消化管,使蒸發(fā)爐內(nèi)水全部排完。

      5、結(jié)果計算:  

                                   C(V樣—V空)HCl ×0.014 × F      
      蛋白質(zhì)含量(%)=—————————————————— × 100                                  

                                            m樣×(V檢/V總)


      式中:C------鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的物質(zhì)量的濃度(mol/L);            
               V樣-----樣品消耗鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積(mL);
               V空-----試劑空白消耗鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積(mL);
               0.014-----氮的毫摩爾質(zhì)量(g/mmol); 
               m樣------試樣質(zhì)量,g;              
               F------氮換算為粗蛋白質(zhì)的系數(shù)。

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